Manejo de la técnica Western Blot. Determinaciones relacionadas con obesidad y diabetes.

Abstract

Introducción: El Western Blot, o protein blotting, es una técnica introducida por Towbin et al. en 1979, que sirve para la inmunodetección y cuantificaión de proteínas específicas en homogeneados celulares complejos. Los receptores activadores de proliferación de peroxisomas (PPAR´s), pertenecen a la súper-familia de receptores nucleares de factores de transcripción inducibles por ligandos. El PPARγ, sobre todo se expresa en el tejido adiposo blanco y marrón, en donde es el principal regulador de la adipogénesis, así como un potente regulador del metabolismo de los lípidos de todo el cuerpo y la sensibilidad a la insulina. Objetivos: El objetivo principal de este trabajo fin de máster, es poner a punto la técnica WB para la detección de PPARγ. Esta puesta a punto permitirá poder cuantificar la expresión de esta proteína en las diferentes muestras con las que se va a trabajar, y por otro lado comprobar si la expresión de esta proteína se ve aumentada (como indica la bibliografía existente). Material y métodos: Muestras de tejido adiposo subcutaneo de ratas Zucker (fa/fa), roedor que presenta obesidad genética, a las que se les administró una estatina (fármaco para el control del colesterol) y muestras de tejido adiposo perirrenal de ratas Wistar alimentadas con una dieta obesogénica (obesidad dietética) a las que se les administró resveratrol (polifenol estudiado en el control de la obesidad). Resultados: Las modificaciones realizadas al protocolo para Western Blot que se utilizaba en el laboratorio permiten la inmunodetección y cuantificación del PPARγ en las muestras que se emplearon en este trabajo. Conclusiones y discusión: Las modificaciones realizadas al protocolo del laboratorio (utilizar geles de 1 mm de grosor, aumentar el tiempo de transferencia de 30 a 40 minutos y emplear el mild-stripping en lugar del hard-stripping) han demostrado su validez para la inmunodetección y cuantificación del PPARγ en modelos de obesidad genética y dietética en ratas.