Implicación de Anexina A5 en la progresión maligna del melanoma humano. Valor pronóstico

Abstract

El melanoma cutáneo es un tumor maligno que se origina a partir de la transformación maligna de los melanocitos de la epidermis. El interés por este tumor es cada vez mayor, ya que la incidencia de esta neoplasia crece de modo constante y alarmante en la población general, pero principalmente en los países desarrollados desde los años 50. Entre las características del melanoma es bien conocido su potencial maligno, es decir, su elevada capacidad de diseminación y de metástasis. Esto, junto con el hecho de que no existe un tratamiento efectivo para el melanoma metastático, lo convierte en un tumor potencialmente letal.En la actualidad, la mejora del tratamiento del melanoma requiere establecer nuevos abordajes terapéuticos y factores pronósticos más eficientes, y para ello es necesaria una comprensión más detallada de las bases moleculares de esta patología. Recientes estudios han implicado a una familia de proteínas, las anexinas, con el desarrollo y la progresión de distintos tumores. Las características biológicas generales de las anexinas incluyen muchas acciones que son directa o indirectamente relevantes en determinados procesos tumorales; destacan su papel en la adhesión celular, la participación en la transducción de señales celulares, la inmunosupresión, la apoptosis, el mantenimiento de la integridad del citoesqueleto y la matriz extracelular y la respuestas frente a estímulos de proliferación y diferenciación celular.El objetivo principal de esta tesis ha sido establecer una relación entre la proteína Anexina A5 (ANXA5) y las propiedades invasivas de las células de melanoma, además de evaluar el posible valor pronóstico de esta proteína ANXA5 en el desarrollo de la enfermedad.Los resultados obtenidos confirman una expresión diferencial de la proteína ANXA5 entre las líneas celulares de melanoma analizadas. Se ha encontrado una correlación significativa entre la expresión de ANXA5 y la capacidad migratoria e invasiva de las líneas celulares de melanoma, lo que sugiere una implicación de dicha proteína en los mecanismos moleculares implicados en la migración y la invasión celular.Tras el silenciamiento del gel ANXA5 se llevaron a cabo estudios de expresión génica utilizando arrays específicos donde se detectaron cambios de expresión de genes relacionados con la capacidad migratoria e invasiva de las células. Concretamente, en las células silenciadas destacan los genes sobreexpresados ARHGEF7, DPP4, PAK1, PAK4, y SRC, y genes cuya expresión se ve reducida: ACTN3, EGFR, FAP, LIMK1, MYL9, PFN1, PTK2, PTK2ß, RAC1, RHO, TGFß1, VEGFA y WASL. Tras seleccionar aquellos genes cuyo cambio de expresión se consideró más significativo, se analizó la variación en la cantidad de las proteínas ARHGEF7, FAP, PTK2ß, RAC1, VEGFA y WASL mediante western blot. A través de los resultados obtenidos se evidencia que ANXA5 posee un efecto sobre las proteínas analizadas que, de modo directo o indirecto, están relacionadas principalmente con la regulación del citoesqueleto de actina.Por otro lado, hemos analizado los niveles séricos de la proteína ANXA5 en 155 pacientes con melanoma y su relación con la progresión maligna de la enfermedad. Los resultados mostraron que los niveles séricos de ANXA5 aumentan significativamente en los pacientes con melanoma frente a los controles sanos, pero especialmente aumentan significativamente en aquellos pacientes que desarrollaron metástasis en los dos primeros años de seguimiento clínico de la enfermedad.Análisis estadísticos multivariantes de regresión logística y análisis de supervivencia de Kaplan-Meyer ponen en evidencia que los niveles séricos elevados de ANXA5 se relacionan con la progresión metastática del tumor. En conclusión, independientemente del estadio tumoral, el aumento de los niveles séricos de ANXA5 es un marcador pronóstico de la progresión metastática.