2-Arakidonilglizerol endokannabinoidearen sintesi- eta degradazio-makineria neuronaren nukleoan: Diazilglizerol Lipasa alfa-ren konpartimentazioa eta aktibitate entzimatikoa

Abstract

Ikerketa lan honetan, zatikapen azpizelularra, Western blot eta fluoreszentzia mikroskopia bidez, diazilglizerol lipasa ¿-ren (DAGL¿) presentzia frogatu dugu arratoi helduaren garun-kortexetik isolatutako nukleoetan. Kromatografia likidoa eta masa-espektrometria erabiliz, DAGL¿ aktibitatea eta 2-arakidonilglizerol (2-AG; garuneko endokannabinoiderik nagusiena) sintesia agerian jarri dugu isolatutako nukleo osoetan. Gure datuen arabera, 2-AG emari nuklearrerako, DAGL¿-k fosfatidilinositol fosfolipasa C isozimek sintetizatutako diazilglizerola (DAG) erabiltzen du. Segidan, 2-AG ekoizpenaren (DAGL aktibitatea) eta degradazioaren (monoazilglizerol lipasa aktibitatea) kontstante entzimatikoak definitu ditugu. Halaber, 2-AG degrada dezaketen entzima naugisen lokalizazioa eta konpartimentazioa deskribatu dugu; hots, monoazilglizerol lipasa (MGL), gantz-azidoen amida hidrolasa (FAAH), ¿/ß hidrolasa domeinudun proteina 12 (ABHD12) eta ziklooxigenasa-2 (COX-2). Horien artean, ABHD12 baino ez genuen aurkitu nukleoen matrizean. Are gehiago, soilik ABHD familiko isozimen inhibitzaileek (baina ez MGL inhibitzaileek) saihesten zuten 2-AG hidrolisia. Hala ere, ABDH aktibitate hidrolitikoak ez zuen eraginik DAGLk bultzatutako 2-AG emaria. Oro har, gure emaitzek DAGL neuronalaren banaketa azpizelularrari buruzko ezagutza zabaltzen dute, eta ebidentzia biokimiko eta morfologikoak eskaintzen dituzte zalantarik gabe ziurtatzeko 2-AG nukleo neuronalaren matrizean ekoizten dela. Hala, lan honek bidea ematen du nukleo neuronaletan ekoiztutako 2-AGren zereginaren inguruko lan-hipotesiak mahai gainean jartzeko.