Cell-based utrophin quantification platform for drug screening in duchenne muscular dystrophy

Abstract

La regulación al alza de la utrofina es una estrategia propuesta para el tratamiento de la distrofia muscular de Duchenne (DMD) por su potencial capacidad para compensar la ausencia de distrofina en el músculo de los pacientes, independientemente de la mutación que presenten. En este proyecto, describimos una plataforma para la cuantificación in vitro de utrofina en cultivos musculares de pacientes con DMD que combina las técnicas myoblot y ddPCR con un cultivo celular que sobre expresa endógenamente utrofina. Este cultivo, ha sido generado en nuestro laboratorio mediante edición génica utilizando CRISPR/Cas9 y posteriormente utilizado como control positivo. Tras su puesta a punto, la plataforma fue utilizada tanto para la evaluación de una batería de compuestos potencialmente moduladores de utrofina, como para la búsqueda de nuevas dianas que sobre expresen utrofina en cultivos celulares. Uno de los compuestos evaluados, un inhibidor de sirtuina 2, demostró aumentar la expresión de utrofina tanto en cultivos DMD humanos como en ratones mdx, modelo de la enfermedad. Por tanto, con este trabajo demostramos la utilidad de esta plataforma para la evaluación de compuestos destinados a sobre expresar utrofina y además proponemos la inhibición de la sirtuina 2, como un novedoso enfoque en la regulación al alza de la utrofina para la búsqueda de terapias frente a la DMD